Centro de Biología Molecular Severo Ochoa (CSIC-UAM), Universidad Autónoma de Madrid.

Laboratorio de Neuroendocrinología Celular y Molecular, Instituto Cajal, CSIC.

Actualmente, el desarrollo de terapias genéticas para desórdenes del cerebelo humano se ve dificultado por la falta de un método seguro y eficaz para transferir genes a las neuronas del cerebelo en vivo. Nosotros hemos estudiado la transducción de neuronas del cerebelo "in vivo" con el amplicón del Virus del Herpes Simplex 1 (HSV-1), el cual lleva el gen lacZ, por inyección del vector en la corteza cerebelar, ventrículos y oliva inferior de ratas adultas.

La inyección en la corteza del cerebelo produce una transducción de células de Purkinje restringida a la zona cercana al lugar de iyección. La inyección en los ventrículos no produce la transducción de ninguna neurona, sin embargo los epéndimos y las células de las meninges sí fueron transducidas. En contraste con este resultado, se consiguió una cierta eficiencia en la transducción de celulas de Purkinje por inyección del vector en la oliva inferior, resultando positiva la transducción de una de cada tres células de Purkinje en los hemisferios cerebelares ipsolaterales y contralaterales.. Como las neuronas en los núcleos cerebelares profundos también son transducidas, sugerimos que el vector se deposite en la oliva inferior de los núcleos cerebelares y entonces irá a las células de Purkinje por transporte axonal retrógrado. La expresión del gen lacZ dentro de las células de Purkinje fue sorprendentemente persistente y se mantuvo al mismo nivel durante por lo menos cuarenta días.

No se observó ninguna señal de toxicidad o inflamación en el cerebelo después de la inyección del vector, salvo en los bordes del lugar de inyección dónde se detectaron algunos astrocitos reactivos. De hecho, la coordinación motora de los animales tratados fue completamente normal una vez evaluados mediante el test "rota rod".

Estos resultados demuestran que el amplicón del vector HSV-1 puede efectuar una expresión transgénica segura y estable en las células de Purkinje "in vivo". Así, este sistema permitirá el traslado del gen específico a las neuronas de Purkinje para los estudios fisiológicos "in vivo" en roedores y aumentan la posibilidad de usar, a largo plazo, estos vectores para la terapia génica en desórdenes cerebelares humanos.